微生物模拟题答案.docx

微生物模拟题答案选择题ADACD BBCBD ABCDB BCDAA DCBAC CAABD ADCAB判断题 填空题1. 压滴法，悬滴法，菌丝埋片法。2. 冷冻保藏法，砂土管保藏法，低温保藏法，载体保藏法。3. 平板划线法，涂布平板法，稀释倒平板法。4. 提高镁离子的浓度，储藏磷元素，有利于致病菌的寄生，防止自溶。5. 脂多糖，磷脂，脂蛋白，蛋白质。6. 活化，出牙，生长。7. 胞外壁，芽孢衣，皮层，核心。8. 荚膜，微荚膜，黏液层，菌胶团。9. 化能自养型，化能异养型，光合自养型，光能异养型。10. 玉米浆，硫化铵；黄豆饼粉，玉米饼粉。11. 可溶性无机磷同化，不溶性磷溶解，有机磷的矿化。12. 固氮酶 电子供体 电子载体 能量。13. L型细菌，原生质体，原生质球和支原体。14. 巴斯德和科赫。15. 营养菌丝，气生菌丝和孢子丝。16. 潜伏期，裂解期，平稳期。17. CCC型OC型L型。18. 转录表达；流产转导；转导失败。19. 非对应性，稀有性，规律性，独立性，可诱变性，遗传性和可逆性。20. F 质粒 抗性质粒 毒性质粒 隐秘质粒。21. 从低营养级流向高营养级。单向传递和能量逐级递减。构成金字塔。22. 生物涤气器，滴滤池，生物滤池。23. 比较DNA碱基组成和进行核酸分子杂交。24. 真细菌原界。古细菌原界。真核生物原界。25. 菌毛 糖被 鞭毛 性菌毛。26. 接合，转化，转导，原生质体融合。27. 菌体发酵，代谢产物发酵。28. 形成二聚体，DNA合成。29. 简单分批发酵，补料分批发酵。30. 有机酸。31. 双名法包括属名和种名。32. 变量实验，涂布实验，影印实验。名次解释1.少数芽孢杆菌（如苏云金芽孢杆菌）在其形成芽孢的过程中，会在芽孢旁形成一颗菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体-内毒速，称为伴孢晶体。2.异核体是由两个不同基因型的体细胞融合形成一个同时含有两个细胞核，但有一个共同细胞质的细胞称为异核体。3.二元培养物：只含有两种且要有意保持两者特定关系的培养物称为二元培养物；如寄生物与寄主。4.同步生长：通过同步培养使细胞群体处于生长分裂步调一致的状态称为同步生长。5.反硝化作用：又称硝酸盐呼吸，以硝酸盐或亚硝酸盐为电子受体进行的厌氧呼吸过程称为反硝化作用，其中硝酸盐被还原生成气态产物N2、N2O。简答题1、2均可在课本上找到答案3. 答:根据F质粒的有无，可以把大肠杆菌分为四种类型菌株；（1） F+菌株：F因子独立存在，细胞表面有性菌毛；（2）F-菌株：不含F因子，没有性菌毛，但可以通过接合作用接收F因子而变成雄性菌株(F+);（3）Hfr菌株：Hfr菌株仍然保持着F+细胞的特征，具有F性菌毛，并像F+一样与F-细胞进行接合；（4）F菌株：Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F因子。染交结果:(1)F + F-染交:F+菌株的F因子通过性菌毛向F-细胞转移，杂交的结果是给体细胞和受体细胞均成为F+细胞；(2)Hfr F-杂交:Hfr菌株的F因子插入到染色体DNA上，F因子除先导区以外，其余绝大部分是处于转移染色体的末端。因此只要发生接合转移过程，就可以把部分甚至全部细菌染色体传递给F-细胞并发生重组。染色体上越靠近F因子的先导区的基因，进入的机会就越多，在F-中出现重组子的的时间就越早，频率也高。由于杂交易被中断，所以F因子不易转入受体细胞中，故HfrF-杂交后的受体细胞(或称接合子)大多数仍然是F-；(3)F F-杂交:给体的部分染色体基因随F一起转入受体细胞，形成一种部分二倍体的接合子。4. 答；土壤样品预处理初筛（去除真菌等其他微生物）培养（在分离平板上培养获得多个单菌落）影印法复印平板UV射线照射菌落铺上含有谷氨酸营养缺陷型试验菌的琼脂层进行培养有生长圈出现的就是谷氨酸产生菌菌落对目的菌落进行提取培养产物测定筛选高产量菌株5.和课本例子相似（相互抑制的循环，简单分析即可。）6.答题思路：（1）简单介绍什么是RNA干扰技术和CRISPR-Cas9。（2）简要介绍一下两种基因编辑技术所设计到的因子，两种方法的构成是不一样的，因此是二者的不同点。不同点还包括一些应用，比如一些小RNA药物等。（3）相同点可以从应用方面出发，均可以在创造基因突变，性状优良的植物或肿瘤治疗等方面。解：RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默，主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。作用机制生物特性RNAi抑制转座子活性；RNAi抵御病毒感染；RNAi参与异染色质的形成和维持；RNAi参与机体的发育调控及生理代谢。特点高效性；特异性；位置效应；竞争效应；可传播性等应用RNAi在探索基因功能中的应用；基因治疗领域；整形外科领域；病毒性疾病的治疗；遗传性疾病的治疗；肿瘤病的治疗；在植物学中的应用等。（知道的可以举个例子。）CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9 系统通过将入侵噬菌体和质粒 DNA 的片段整合到 CRISPR 中，并利用相应的 CRISPR RNAs(crRNAs)来指导同源序列的降解，从而提供免疫性。基本可适用于一切生物。1、第一阶段：CRISPR 的高度可变的间隔区的获得（俘获外源DNA，登记“黑名单”）CRISPR 的高度可变的间隔区获得，其实就是指外来入侵的噬菌体或是质粒DNA 的一小段DNA 序列被整合到宿主菌的基因组，整合的位置位于CRRSPR 的5 端的两个重复序列之间。因此，CRISPR 基因座中的间隔序列从5 到3 的排列也记录了外源遗传物质入侵的时间顺序。新间隔序列的获得可能分为三步：第1步：Cas1和Cas2编码的蛋白将扫描入侵的DNA，并识别出PAM区域，然后将临近PAM的DNA序列作为候选的原型间隔序列。第2步：Cas1/2蛋白复合物将原间隔序列从外源DNA中剪切下来，并在其他酶的协助下将原间隔序列插入临近CRISPR序列前导区的下游。第3步：DNA会进行修复，将打开的双链缺口闭合。这样一来，一段新的间隔序列就被添加到了基因组的CRISPR序列之中。2、第二阶段：CRIPSR 基因座的表达（包括转录和转录后的成熟加工）CRISPR序列在前导区的调控下转录产生pre-crRNA（crRNA的前体），同时与pre-crRNA序列互补的tracrRNA（反式激活crRNA）也被转录出来。pre-crRNA通过碱基互补配对与tracrRNA形成双链RNA并与Cas9编码的蛋白组装成一个复合体。它将根据入侵者的类型，选取对应的“身份证号码”（间隔序列RNA），并在核糖核酸酶（RNase）的协助下对这段“身份证”进行剪切，最终形成一段短小的crRNA（包含单一种类的间隔序列RNA以及部分重复序列区）。crRNA，Cas9以及tracrRNA组成最终的复合物，为下一步剪切做好准备。3、第三阶段：CRISPR/Cas 系统活性的发挥（靶向干扰）crRNA，Cas9以及tracrRNA组成最终的复合物就像是一枚制导导弹，可以对入侵者的DNA进行精确的打击。这个复合物将扫描整个外源DNA序列，并识别出与crRNA互补的原间隔序列。这时，复合物将定位到PAM/原间隔序列的区域，DNA双链将被解开，形成R-Loop。crRNA将与互补链杂交，而另一条链则保持游离状态。随后，Cas9蛋白精确的平端切割位点位于PAM上游3个核苷酸位置，形成平末端产物。Cas9蛋白的HNH结构域负责切割与crRNA互补配对的那一条DNA链，而RuvC结构域负责切割另外一条非互补DNA链。最终在Cas9的作用下DNA双链断裂（DSB），外源DNA的表达被沉默，入侵者被一举歼灭。三、CRISPR-Cas9基因编辑技术及应用tracrRNA-crRNA在被融合为单链向导RNA（sgRNA）时也可以发挥指导Cas9的作用。CRISPR-Cas9基因编辑技术可以通过人工设计的 sgRNA（guide RNA）来识别目的基因组序列，并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的。基因敲除；基因敲入；基因抑制、基因激活；多重编辑；功能基因组筛选